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貼壁細胞傳代過程

日期:2025-04-16 23:10
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摘要: 貼壁細胞傳代過程: 1:對于貼壁細胞來說,它需要把上清去掉,用1-2ML的PBS洗一下細胞,然后用槍吸去洗滌液,然后加入胰酶進行細胞消化。(加入1-2ML的PBS, 我是會貼壁加入到培養(yǎng)皿的邊緣,不能直接對著細胞加入PBS,容易把細胞都吹起來。這一步的目的是為了去掉殘余的培養(yǎng)基的,殘余的培養(yǎng)基會含有血清和一些離子等,不利于接下來的消化。此外,常見的是0.25%的胰酶。一般根據(jù)細胞皿的大小加入胰酶,對于10cm的dish,我會加入1ml的胰酶。) 2:放到37攝氏度培養(yǎng)箱30s-1min(我這里處理的是293T細胞,不同的細胞的消...

貼壁細胞傳代過程:

1:對于貼壁細胞來說,它需要把上清去掉,用1-2ML的PBS洗一下細胞,然后用槍吸去洗滌液,然后加入胰酶進行細胞消化。(加入1-2ML的PBS, 我是會貼壁加入到培養(yǎng)皿的邊緣,不能直接對著細胞加入PBS,容易把細胞都吹起來。這一步的目的是為了去掉殘余的培養(yǎng)基的,殘余的培養(yǎng)基會含有血清和一些離子等,不利于接下來的消化。此外,常見的是0.25%的胰酶。一般根據(jù)細胞皿的大小加入胰酶,對于10cm的dish,我會加入1ml的胰酶。)

2:放到37攝氏度培養(yǎng)箱30s-1min(我這里處理的是293T細胞,不同的細胞的消化時間是不一樣的,需要具體的去查一查,如果消化的好的細胞是會呈現(xiàn)流沙狀態(tài)的,上下晃動都會隨著移動的。)


3:加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化,用槍把培養(yǎng)液吹勻。(因為含有血清可以終止胰酶的消化反應(yīng),用槍吹培養(yǎng)皿底是為了把殘留在底部的細胞吹起來)

4:轉(zhuǎn)移到15ml的離心管中,離心,200g 5-10min(一般我是1000rpm離心3min)

5:去掉上清液,然后用PBS 重懸細胞,加入的PBS的量是10ML。再次離心,去掉上清。

6:加入適量的培養(yǎng)基,把細胞重懸,然后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿里面。放入到37攝氏度的5%的二氧化碳培養(yǎng)箱。

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